Częstość disomii uniparentalnej w zespole Pradera-Willego – implikacje dla diagnostyki molekularnej ad

Jednak rodzicielskie pochodzenie delecji różni się: tylko u ojca występują delecje w zespole Pradera-Williego, 16 17 18 i tylko macierzyńskie delecje zostały wykazane w zespole Angelmana. 10,11, 19 Zależność wyniku klinicznego od rodzicielskiego pochodzenia jest silnie wspierane przez demonstrację molekularną w zespole Pradera-Williego z matczynej disomii równomiernej (w której obie kopie chromosomu 15 są odziedziczone po matce i żadne nie są dziedziczone po ojcu) .20 W zespole Angelmana wykazano ojcowską disomię jednoparentarną.21, 22 Obserwacje te sugerują, że ekspresja fenotypowa obu zespołów jest determinowana przez rodzicielskie pochodzenie genu lub genów w obrębie chromosomu 15q11q13. Różnicowa modyfikacja i ekspresja alleli genu zależnego od pochodzenia rodzicielskiego są znane jako imprinting genomowy. Zespoły Pradera-Willi i Angelmana są najczystszymi przykładami do tej pory wszczepiania genomu u ludzi.20, 23 24 25 Ta odmienna ekspresja została następnie potwierdzona w dwóch dodatkowych badaniach, 26, 27 i niedawnym artykule redakcyjnym w czasopiśmie, który dokonał przeglądu implikacji klinicznych odcisk genomu. 28 Ponieważ analiza molekularna ujawniła duże delecje 15q11q13 u wielu pacjentów z zespołem Pradera-Williego, 10, 13, 18 i wstępne badania u pacjentów bez tej delecji wykazały disomię jednowymiarową, 20 zaprojektowaliśmy badanie w celu określenia częstości disomii jednozasadowej u pacjentów którzy mają zespół Pradera-Willego, ale nie klasyczną delecję chromosomu 15q11q13.
Metody
Pacjenci
Aby kwalifikować się do badania, pacjenci musieli mieć cechy uważane za niezbędne do rozpoznania zespołu Pradera-Williego, co udokumentowano na podstawie oceny klinicznej lub badania dokumentacji medycznej1, 2, 29; oboje rodzice biologiczni są dostępni do nauki; i brak dowodów na delecję chromosomu 15q11q13 na podstawie oceny cytogenetycznej. Trzydziestu pacjentów spełniało kryteria i włączono je do badania. Trzech pacjentów (jedna kobieta i dwóch mężczyzn) z cytogenetycznymi delecjami chromosomu 15 włączono do badania jako kontrole. Populacja badana obejmowała jeden zestaw jednojajowych bliźniaków zgodnych z zespołem Pradera-Williego (Pacjenci 7a i 7b), jeden czarny pacjent (Pacjent 28), jeden pacjent (Pacjent 14) z samoistną translokacją zrównoważoną (t (8; 18) (p24) .1; q23)) i jedną mozaikę pacjenta (Pacjenta 26) dla chromosomu markerowego nieznanego pochodzenia. Było 15 mężczyzn i 15 kobiet, w wieku od 2 do 41 lat. Pacjenci w wieku 2, 3, 4, 5 i 6 zostali opisani w poprzednim raporcie30. Ponadto, wcześniej zgłoszono wstępne odkrycia molekularne u Pacjentów i 2. 20
Badania cytogenetyczne i molekularne
Przeprowadzono badania chromosomalne u każdego pacjenta na poziomie 550 pasm przy użyciu standardowych technik. 17, 31, 32. W badaniach molekularnych genomowy DNA ekstrahowano z limfocytów krwi obwodowej, 33 i 3 .g DNA trawiono odpowiedni enzym restrykcyjny. DNA następnie rozdzielono przez elektroforezę w żelu agarozowym, przeniesiono na membrany nylonowe i prehybrydyzowano i hybrydyzowano z sondami DNA w standardowych warunkach.18 Błony przepłukano w 56 ° C lub 49 ° C dla sondy IR4-3R, w 0,1 x soli fizjologicznej. bufor cytrynianowy sodu (0,015 mola chlorku sodu na litr, 0,0015 mola cytrynianu sodu na litr i 0,1% dodecylosiarczanu sodu) przez jedną godzinę.
Sondy DNA
W badaniach molekularnych użyto siedmiu sond DNA swoistych dla chromosomu 15q11q13 (zdefiniowane loci podano w nawiasach): 34 (D15S9), 3-21 (D15S10), IR4-3R (D15S11), IR10-1 (D15S12), 189 -1 (D15S13), IR39d – subfragmentacja SacI / Hindlll IR39 (D15S18) – i CMW-1 (D15S24) .18, 34, 35 Polimorfizmy długości fragmentów restrykcyjnych (RFLP) dla tych sond zostały opisane poprzednio18, 20, 35 Ponadto, analizowano trójliniowy RFLP dla IR4-3R z trawionym KpnI DNA po oddzieleniu przez elektroforezę żelową z odwróceniem pola (dane niepublikowane)
[hasła pokrewne: sernik bananowy na zimno, diuramid, aspen fraxiparine ]