Mutacje JAK2 Exon 12 w przypadku czerwienicy purpurowej i idiopatycznej erytrocytozy czesc 4

Ekspozycję na supernatant retrowirusowy i wirowanie powtarzano dzień później. Porcje komórek szpiku kostnego x 106 zawieszono ponownie w 0,7 ml zbilansowanego roztworu soli Hank a, a następnie wstrzyknięto do letalnie napromieniowanych myszy BALB / c. Liczbę krwinek obwodowych i morfologię komórek oceniono dla każdego biorcy 38 dni po transplantacji. Analiza statystyczna
Zastosowaliśmy niesparowany test t-Studenta do porównania cech demograficznych i laboratoryjnych w momencie diagnozy między pacjentami z mutacją V617F JAK2 i tymi z mutacją eksonów 12 JAK2 oraz do porównania liczby komórek krwi obwodowej u mysich biorców komórek szpiku wyrażających dziki -type, V617F lub K539L Jak2. Dokładny test Fishera zastosowano do porównania częstości mutacji dodatnich kolonii erytroidalnych i kolonii homozygotycznych pod względem mutacji między pacjentami z mutacją V617F a pacjentami z mutacją eksonów 12.
Wyniki
Mutacje somatyczne wpływające na JAK Exon 12
Figura 1. Figura 1. Mutacje somatyczne JAK2 Exon 12 u pacjentów z czerwienią rumiankową lub idiopatyczną erytrocytozą. Panel A pokazuje ślady sekwencji DNA z granulocytów krwi obwodowej i limfocytów T oraz z kolonii erytroidalnych niezależnych od erytropoetyny. Nukleotydy są oznaczone dużymi literami, gdzie N oznacza miejsca, w których nukleotydy typu dzikiego i zmutowane są widoczne w tej samej pozycji. Ślady ujawniają cztery nabyte mutacje w eksonie 12 JAK2 (wskazanym przez groty strzałek), często z niskim poziomem zaangażowania w granulocyty. Panel B (na górze) pokazuje dopasowanie alleli typu dzikiego i zmutowanych egzonów 12 JAK2 (pokazanych na czerwono) (nukleotydy są oznaczone dużymi literami i aminokwasami pogrubioną literą, a kreski wskazują pozycje usuniętych nukleotydów). Przyrównanie aminokwasów u wielu gatunków (panel B, u dołu) pokazuje konserwację zmutowanych aminokwasów, zaznaczoną na czerwono.
Spośród 73 pacjentów z czerwienicą prawdziwą w naszej oryginalnej kohorcie, 2 nie miało mutacji V617F4 i były dalej badane. U tych dwóch pacjentów nie znaleziono mutacji w kodujących eksonach JAK1, JAK3, TYK2, STAT5A lub STAT5B. Jednak obaj pacjenci mieli zmiany w eksonie 12 JAK2, które wpłynęły na pozostałości leżące około 80 aminokwasów przed V617. Jeden pacjent miał delecję w ramce o 6 bp, działającą na pozycje 1611 do 1616, co skutkowało mutacją F537-K539delinsL. Drugi pacjent miał mutację CAA . ATT w pozycjach od 1614 do 1616, co skutkowało mutacją H538QK539L (Figura 1A). Mutacje te zostały nabyte, ponieważ można je wykryć w granulocytach krwi obwodowej, ale nie w limfocytach T.
Mutacje eksonowe 12 JAK2 zidentyfikowano u ośmiu z dodatkowych dziewięciu pacjentów, którzy otrzymali diagnozę niedoboru czerwienicy V617F od ich lokalnych lekarzy. Mutacje były często obecne na niskich poziomach w DNA granulocytów, ale były łatwo identyfikowalne w koloniach erytropoetynowych niezależnych od erytropoetyny (Figura 1A). W sumie zidentyfikowano cztery allele egzonów 12, z których wszystkie miały zmiany wpływające na konserwatywne reszty między K537 i E543 (Figura 1); trzy allele (w Pacjentach od do 6) zawierały podstawienie K539L (ryc. 1B)
[hasła pokrewne: usg kolana kraków, lipoliza łódź, wniosek o leczenie psychiatryczne bez zgody pacjenta wzór ]
[podobne: lek bez recepty na hemoroidy, olx ryki, nfz kraków batorego ]